DAPI染色試劑盒

2-8℃避光

1.長期不用可以-20℃保存。
2.染色液避免反復凍融。需要長期保存時可以根據(jù)使用情況進行小量分裝后-20℃保存。
3.試劑拆封后請盡快使用完！

6個月

1.流式細胞儀
2.激光共聚焦
3.熒光顯微鏡

1.懸浮細胞
2.貼壁細胞

1.流式細胞儀
2.激光共聚焦
3.熒光顯微鏡

1.PBS 緩沖液（pH7.4，實驗室常用的10mM磷酸緩沖鹽溶液（1X））
2.或者HBSS（Hank's Balanced Salt Solution）

1.離心管
2.吸頭
3.一次性手套

1.螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋內(nèi)壁上的液體收集至管底，避免開蓋時液體灑落。
2.細胞處理需要小心操作,盡量避免人為的損傷細胞。
3.染色后立即進行分析。
4.染色時間根據(jù)不同樣本的實際染色結果做相應調整。
5.本染色液可用于培養(yǎng)細胞、細胞涂片、石蠟切片、冰凍切片的檢測。石蠟切片用常規(guī)方法脫蠟、分化、冰凍切片用冰丙酮固定后檢測。
6.根據(jù)樣本情況和下游的檢測儀器選擇合適的染色方法，只要在染色時染色工作液能充分覆蓋細胞樣本即可。
7.活細胞原位染色不同細胞需要的時間差異較大，可能需要較長時間，可將染液加入培養(yǎng)基后避光孵育30分鐘-4小時，或更長時間。
8.以下以培養(yǎng)細胞的涂片的熒光顯微鏡檢測為例，細胞染色不需要固定，也可以固定后染色。以下方法僅供參考，也可以請參閱相關資料使用其他方法。

1. 染色工作液的配制：
根據(jù)樣品數(shù)用PBS將DAPI染色液10-100倍稀釋，配制成染色工作液。
2. 細胞爬片/涂片的制備：
貼壁細胞，可將蓋玻片放于培養(yǎng)器皿中，讓培養(yǎng)細胞長于玻片上，然后用藥物誘導細胞凋亡后取出，用4%多聚甲醛固定5min。
對于懸浮細胞，用藥物誘導細胞凋亡后，500-1000g離心5分鐘收集細胞，用PBS洗2次，收集調整細胞數(shù)為1X105/ml，涂片或用離心涂片，用4%多聚甲醛固定5min；
3. 用PBS洗滌涂片兩次。
4. 加適量染色工作液于涂片上，室溫避光染色5-30分鐘。
5. 吸除染色液。
6. 用1X洗滌液洗滌涂片。
7. 用熒光顯微鏡檢測結果。
染料-DNA復合物的激發(fā)波長為360nm，發(fā)射波長為454nm。

結果分析 ：
置于熒光顯微鏡下用360nm激發(fā)光觀察結果：DAPI染色呈藍白色熒光。

早期凋亡細胞呈現(xiàn)核濃縮，染色加深，或核染色質呈新月形聚集于核膜一邊；晚期凋亡細胞表現(xiàn)為核碎裂成大小不等的圓形小體，并被細胞膜所包繞，即凋亡小體。

1.Xiaojun Zhou et al.
BMP-2 Derived Peptide and Dexamethasone Incorporated Mesoporous Silica Nanoparticles for Enhanced Osteogenic Differentiation of Bone Mesenchymal Stem Cells
ACS Appl. Mater. Interfaces 2015 （IF=7.145）

2.Siqin Huang et al.
Protective Effect of Electroacupuncture on Neural Myelin Sheaths is Mediated via Promotion of Oligodendrocyte Proliferation and Inhibition of Oligodendrocyte Death After Compressed Spinal Cord Injury
Molecular Neurobiology 2015 （IF=5.397）

3.Wei Feng et al.
Polyelectrolyte multilayer functionalized mesoporous silica nanoparticles for pH-responsive drug delivery: layer thickness-dependent release profiles and biocompatibility
Journal of Materials Chemistry 2013 （IF=6.101）

4.Xue Gao, Hao Zhang et al.
Mn-doped ZnSe d-dots-based α-methylacyl-CoA racemase probe for human prostate cancer cell imaging
Analytical and Bioanalytical Chemistry 2012 （IF=3.841）