無酶細胞消化液

-20℃保存

1、長期存放請分裝后-20℃保存。
2、避免反復凍融。
3、凍存后溶解時注意重新混勻。

一年

1. PBS、培養(yǎng)液
2. 顯微鏡
3. 離心機

1) 盡量減少反復凍融的次數(shù)，以免失效。
2) 在使用細胞消化液的過程中，要特別注意避免消化液被細菌污染。
3) 細胞消化液消化細胞時間不宜過長，否則細胞鋪板后生長狀況會較差。
4) 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

1. 貼壁細胞的消化：
（1） 吸除培養(yǎng)液，用無菌PBS、培養(yǎng)液洗滌細胞1次；
（2） 加入少量無酶細胞消化液，略蓋過細胞即可。（一般按細胞的有效體積的10倍添加）
（3） 室溫放置10min （如置于37℃脫壁反應會加速），直至細胞脫壁。（不同細胞消化時間有差異）。亦可用顯微鏡觀察，如果細胞明顯收縮并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現(xiàn)細胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變化；或者用槍頭吹打細胞發(fā)現(xiàn)細胞剛好可以被吹打下來，吸除消化液。
（4） 加入細胞培養(yǎng)液或5倍體積的PBS緩沖液終止反應。如果發(fā)現(xiàn)消化不足，則再加入無酶細胞消化液重新消化。
（5） 1000-2000g離心3-5min，沉淀細胞，棄上清，盡量吸除無酶細胞消化液，加入含血清的培養(yǎng)液重新懸浮細胞，即可用于后續(xù)實驗。

2. 組織的消化：
（1） 用無菌PBS、培養(yǎng)液洗滌組織1次，用無菌的刮勺或茶匙將剪碎的組織碎片轉(zhuǎn)移至合適容器。
（2） 按組織有效體積的5-10倍，加入無酶細胞消化液。
（3） 置于37℃作用4-48小時，無需振蕩，不同的細胞消化時間有所不同。對于較難分解的腫瘤細胞，可作用5天或更長時間，但應重新用消化液懸浮。
（4） 吹打組織碎片數(shù)次，釋放松散的細胞，輕輕晃動培養(yǎng)瓶或皿，倒置顯微鏡下檢查分離情況。當細胞量少和/或在組織碎片中仍可見細胞時，需要繼續(xù)消化。
（5） 1000-2000g離心3-5min，沉淀細胞，棄上清，盡量吸除無酶細胞消化液，加入含血清的培養(yǎng)液重新懸浮細胞，即可用于后續(xù)實驗。