細(xì)胞膜完整性檢測試劑盒-紅色熒光

2-8℃避光

1.有效期為試劑盒未拆封前按要求條件保存的有效期。
2.試劑拆封后請盡快使用完！

6個(gè)月

顯微鏡

動(dòng)物細(xì)胞

1. 熒光顯微鏡/激光共聚焦/流式細(xì)胞儀/熒光酶標(biāo)儀/熒光光度計(jì)等
2. 離心機(jī)
3. 移液器
4. 冰箱
5. 冰盒

1. PBS緩沖液
2. 或者HBSS

1.離心管
2.吸頭
3.一次性手套

1. 細(xì)胞處理需要小心操作,盡量避免人為的損傷細(xì)胞。
2. 標(biāo)記的條件因細(xì)胞種類而異，根據(jù)不同樣本的實(shí)際染色結(jié)果做相應(yīng)調(diào)整，在每次實(shí)驗(yàn)前，請先根據(jù)不同的實(shí)驗(yàn)要求、細(xì)胞類型、細(xì)胞的膜通透性等進(jìn)行優(yōu)化，確定條件。以下方法僅供參考。
3. 染色后立即進(jìn)行分析。
4. 以下以顯微鏡觀察為例，也可以根據(jù)需要設(shè)定對照細(xì)胞，用破膜劑破膜后染色，用流式/酶標(biāo)儀/熒光光度計(jì)等設(shè)備檢測樣品細(xì)胞相對于對照細(xì)胞的膜破損率。

染色工作液配制
用染料稀釋液將T11細(xì)胞染料50-500倍稀釋，配成染色工作液，充分混勻備用。
【注】:
? 也可以不用試劑盒中的稀釋液，直接用PBS等稀釋。

細(xì)胞染色
對于貼壁細(xì)胞
1. 制備需要檢測的細(xì)胞模型。
2. 待細(xì)胞生長到合適豐度，吸除培養(yǎng)液，加入適量37℃預(yù)熱的染色液。于生長狀態(tài)下孵育1分鐘～10分鐘（具體孵育時(shí)間需根據(jù)細(xì)胞類型而定）。
3. 用PBS/HBSS洗滌細(xì)胞3-4次。每次盡可能吸干PBS。
【注】:
? 注意細(xì)胞操作的整個(gè)過程，避免人為的細(xì)胞膜損傷。例如采用合適的離心力大小。
4. 加入新鮮培養(yǎng)基或PBS并在熒光顯微鏡（含合適濾片）下觀察。
激發(fā)/發(fā)射波長550/610nm。
【注】:
? 若細(xì)胞染色太強(qiáng)，建議降低染料濃度或縮短染色時(shí)間。
? 若染色不夠充分，無熒光細(xì)胞，建議增加染料濃度或延長染色時(shí)間。

對于懸浮細(xì)胞
1. 離心，吸除上清。
2. 利用37℃預(yù)熱的探針工作液重懸細(xì)胞，于生長狀態(tài)下孵育1分鐘～10分鐘（具體時(shí)間需根據(jù)細(xì)胞類型而定）。
3. 離心，吸除染色液。
4. 用PBS/或HBSS洗滌細(xì)胞3-4次。每次盡可能吸干PBS。
【注】:
? 注意細(xì)胞操作的整個(gè)過程，避免人為的細(xì)胞膜損傷。例如采用合適的離心力大小。
5. 加入新鮮培養(yǎng)基或PBS重懸細(xì)胞。
6. 置于熒光鏡下觀察。
激發(fā)/發(fā)射波長550/610nm。
【注】:
? 對于懸浮細(xì)胞，也可將細(xì)胞貼附于經(jīng)細(xì)胞粘合劑處理過的蓋玻片上，然后使用類似于貼壁細(xì)胞的方法進(jìn)行染色。
? 若細(xì)胞染色太強(qiáng)，建議降低染料濃度或縮短染色時(shí)間。
? 若染色不夠充分，建議增加染料濃度或延長染色時(shí)間。

觀察結(jié)果：
在熒光顯微鏡（含合適濾片）下觀察細(xì)胞。激發(fā)/發(fā)射波長為550/610nm。
膜完整細(xì)胞沒有熒光，膜不完整細(xì)胞顯紅色熒光。